FECUNDACION
El
desarrollo de las
técnicas de fecundación
in vitro - FIV - así
como las técnicas
de cultivo de
embriones preimplantados en
mamíferos, han permitido
comprender los mecanismos
celulares y moleculares
de la interacción
gamética, que en
último término llevan
a la fecundación.
Para que tenga
lugar la fecundación es necesario que los gametos tanto femeninos como
masculinos sufran un proceso de maduración intracelular que los hace aptos para
el intercambio de estructuras que dará lugar a un nuevo individuo.
TRANSPORTE GAMETICO
TRANSPORTE DEL OOCITO
El período durante el cual el óvulo
eclosionado permanece viable varía entre 12 y 24 horas. Pierde su capacidad fecundante al
llegar al istmo del oviducto y es completamente infecundo al llegar al útero.
Todos los óvulos no fecundados se
desintegran y fagocitan dentro del
útero.
El tiempo
de transporte del
óvulo en el
oviducto varía según
la especie y
depende de :
§ Contracción de la
musculatura oviductal.
§ Corrientes y contracorrientes de
los líquidos en
el oviducto
§ Actividad secretora de células
no ciliadas influida por
los estrógenos y
progesterona.
§ Hidrodinámica y propiedades
reológicas de los
líquidos oviductales.
Es
importante la sincronía
entre la ovulación
y la inseminación
con el fin
de lograr una
pronta fecundación. En monta
natural el envejecimiento del
óvulo antes de
la penetración
del
espermatozoide es bajo.
Durante
la eyaculación los espermatozoides junto con el plasma seminal pasan por la
uretra y a través de movimientos peristálticos se liberan en el tracto genital
femenino. La eyaculación es el reflejo de expulsión de los espermatozoides y el
plasma seminal fuera del tracto reproductivo. El reflejo eyaculatorio es el
resultado de la estimulación sensorial especialmente en el glande, lo que causa
contracciones musculares coordinadas. Una vez se introduce el pene en la vagina
se inicia el reflejo por impulsos que se transmiten del glande a través del
nervio púbico hasta la región lumbosacra de la médula espinal. Así el semen es
forzado a pasar a la uretra lo que induce la contracción de los músculos
uretrales, isquiocavernosos y bulboespongiosos. El eyaculado contiene, además,
las secreciones de las glándulas anexas (vesículas seminales, próstata, glándulas
bulbouretrales).
Luego de depositado el semen, los espermatozoides están expuestos a una serie de circunstancias ambientales que alteran significativamente su número y función.
Las pérdidas
de espermatozoides en el
tracto genital femenino depende
de la naturaleza física del eyaculado y
el sitio de la deposición. Los
espermatozoides se pierden en
el tracto femenino por transporte retrógrado y
muchos son fagocitados por los
leucocitos, que desde el punto
de vista inmunológico actúan como
cuerpos extraños, no diferenciando
entre vivos o muertos. De hecho un leucocito puede fagocitar varios espermatozoides móviles.
Además son importantes para prevenir infecciones
del tracto genital.
El transporte de espermatozoides después de la cópula puede dividirse en dos fases, una fase de transporte rápido y una fase de transporte lento o prolongado durante la fase rápida los mecanismos del tracto genital permiten la llegada del los espermios al oviducto sin la participación activa de estos.
Lo más importante del transporte es la fase de transporte lento durante la cual los espermatozoides son llevados al oviducto de manera sorpresiva desde los reservorios en el cérvix y la unión útero tubar. Estos sitios de colonización son los mismos lugares de depósito.
Sin embargo, investigaciones recientes demuestran que los espermatozoides que llegan al oviducto a los pocos minutos después de la cópula no eran viables, por lo que su importancia puede solamente representar un exacerbación de la actividad de transporte por la contractilidad del tracto femenino junto con la cópula. Estudios recientes demuestran que un alto porcentaje de los espermatozoides depositados en el útero en la vaca se pierden por transporte retrógrado. En la IA el 60% se pierden por este mecanismo dentro de las 12 horas siguientes a su depósito. Por lo anterior se ha recomienda depositar el semen en lo más anterior posible del cérvix, lo que implica una nueva instrucción del personal responsable de la inseminación.
Luego del servicio en la vaca los espermatozoides deben sortear el sistema altamente circunvolucionado del cerviz por medio de su capacidad natatoria en el medio mucoso compuesto por sialomucinas y sulfomucinas. Las primeras muy viscosas desempeñan un mecanismo de lavado y las segundas más fluidas facilitan el movimiento y la natación del esperma.
El tiempo requerido para que el espermatozoide móvil entre y atraviese este medio especial influye significativamente en la fase de transporte lento. (SENDER)
La producción diaria de
espermatozoides y la cantidad de espermatozoides fértiles está notablemente
relacionada con el tamaño testicular. Este se estima por la longitud y el
grosor o bien por la circunferencia escrotal. Sin embargo estos parámetros
están influenciados por la raza, el fenotipo y la edad, no pudiendose
establecer estandares para todas las razas y edades.
El bovino eyacula de
Existen grandes diferencias entre
las características de producción de espermatozoides entre toros, entre el
primer y segundo eyaculado y entre los intervalos de una recolección a otra.
La utilización prolongada de eyaculados colectados a una frecuencia elevada, comenzando en la pubertad, no tiene efecto negativo sobre el crecimiento o la eficiencia reproductiva de los toros. (HAFEZ)
MADURACION FINAL DEL OOCITO
La
maduración del oocito no
se limita a la fase
folicular, sino que ocurre
desde la fase
de embriogénesis. Se
presenta en cuatro fases
que son:
1.- División
mitótica de las CGP.
2.- Detención del
desarrollo nuclear en
fase de dictioteno.
3.- Crecimiento citoplasmático.
4.- Reinicio
de la meiosis.
La división mitótica se efectúa
antes del nacimiento y
asegura que la
hembra nazca con
una cantidad suficiente
de células germinales que formarán
el reservorio de
los futuros folículos. La
última división mitótica de
la oogonia se constituye en
un paso importante para que el oocito
primario entre en la primera
división de la
profase meiótica. Durante
este período el
núcleo del oocito primario permanece inactivo hasta
que es estimulado
por las gonadotropinas luego de
la pubertad, hasta la
ovulación.
El
propósito de esta suspensión es el de inactivar
el ADN en
el gameto femenino
de tal manera
que no sea
vulnerable a posibles
lesiones durante el período
de vida de
la hembra. Las lesiones
o daño del gameto
femenino puede comprometer
la reproducción al
inducir la muerte
embrionaria después de la
fecundación.
Una vez
el folículo entra
en la fase
de dominancia, el oocito alcanza un tamaño mínimo crítico y adquiere la
capacidad de reiniciar la meiosis, cuando ocurre la
descarga preovulatoria de LH.
Poco
después del pico de LH,
las uniones GAP
entre las células de la granulosa y
el oocito se
deterioran. Cuando las
proyecciones de las
células de la
granulosa se disocian del
citoplasma del oocito, el
AMPc junto con el
inhibidor meiotico del oocito
dejan de
suspender el desarrollo del
oocito y este queda
libre para iniciar
la primera división meiótica.
En el
folículo dominante, el
núcleo del oocito
comienza a migrar hacia
la periferia y se adosa contra
la membrana plasmática del oocito, lo
que se constituye
en el primer
signo morfológico de la iniciación
de la maduración final del
oocito.
En
rumiantes el núcleo se vuelve
polimórfico y adquiere varias
lobulaciones seguidas de la
disociación de la membrana
nuclear. Los cromosomas bivalentes
se alinean y las cromátidas
se separan por
el sistema de
microtubulos que empujan aparte a
los cromosomas, formando el
primer cuerpo polar. Esta
primera división meiótica ocurre
poco antes de
la ovulación.
La activación
del ovocito, expresada en el Reinicio de
la meiosis se
puede poner en
evidencia por la eliminación del
segundo polocito, 20 a
30 minutos después
de la fusión
gamética. El set haploide de
cromosomas del ovocito
forma el pronúcleo
hembra, que junto
con el pronúcleo macho, restablece
el número diploide de
cromosomas de la
especie para iniciar
el desarrollo de
un nuevo individuo. (BARROS)
Después
de la fecundación sucede la segunda división
meiótica produciendo el segundo
cuerpo polar. En algunos
casos, el primer cuerpo
polar se divide
produciendo dos cuerpos
polares hijos, por lo
que se pueden ver
tres cuerpos polares.
MADURACION DEL
ESPERMATOZOIDE
El período de vida
de los espermatocitos secundarios es de unas pocas horas, dividiendose
rápidamente por mitosis para dar lugar a las
espermátidas, también haploides, para transformarse en espermátidas
maduras elongadas con cabeza y cola que posteriormente serán liberadas en la
luz del túbulo seminífero. Estos cambios tienen lugar en el núcleo y el
citoplasma. Estas células están unidas
entre sí por puentes citoplasmáticos y
en comunicación con las células nutricias o de Sertoli, las
que inducen a partir de células
señalizadoras la maduración final de la
espermiogénesis.
La espermiogenesis
consta de cuatro fases, las cuales se
clasifican mediante la reacción de PAS (Periodic Acid Shiff) al teñir
los componentes acrosómicos en desarrollo de un color rojo oscuro
El
papel del espermatozoide maduro
es el de liberar el
material genético a un oocito maduro
durante la fecundación. Para que
estas células sean capaces de fertilizar, las espermátidas esféricas sufren una
serie de cambios en los cuales el
núcleo se vuelve altamente
condensado, se forma el acrosoma y
la célula se
hace móvil. La capacidad de nadar
o motilidad, requiere del desarrollo
de un flagelo y una fuente generadora conocida como hélice mitocondrial.
Este proceso
consta de cuatro fases: Fase de Golgi – Fase de Capuchón – Fase de Acrosomal – Fase de
maduración
La Fase de Golgi es el primer paso para la formación del acrosoma. En esta fase la organela del mismo nombre se acerca al núcleo, desprende vesículas que se le sobreponen y poco a poco se unen para convertirse en la vesícula acrosomal que se localiza en la parte apical del núcleo. Los centríolos situados en forma de T, muy cercanos al aparato de Golgi, van migrando hacia lo que será la base del núcleo.
El
centríolo proximal se sitúa en la parte basal del núcleo y, a partir del
centríolo distal crece el axonema conformado por dos microtúbulos centrales y 9
pares de microtúbulos periféricos.
En la fase de
capuchón, la vesícula acrosomal se aplana formando una verdadera capucha sobre
el núcleo. El núcleo se compacta mucho más al cambiar las histonas por
protaminas, de tal forma que no puede haber ni replicación ni transcripción
(Fase G0 del ciclo celular).
La inactividad transcripcional
del núcleo hace que el espermatozoide sea dependiente de modificaciones
postranscripcionales como la fosforilación de proteínas necesarias para adaptar
su función de acuerdo a las necesidades.
En la Fase Acrosomal la espermátida gira de tal forma que el acrosoma queda en dirección de la membrana basal; se depositan gránulos en el acrosoma, el citoplasma se desplaza hacia la base de la cabeza y se localiza por debajo de la unión núcleo axonema; las mitocondrias se agrupan alrededor de este último en su parte cercana al núcleo, formando la pieza media. En esta fase el espermatozoide adquiere su morfología definitiva.
El acrosoma es una
membrana lisosomal que contiene
enzimas hidrolíticas como
la acrosina, hialuronidasa, zona
lisina, esterasas e hidrolasas ácidas, necesarias para la
penetración de la zona
pelúcida del oocito.
Finalmente se sucede la Fase de Maduración, donde se observan las características
finales de los espermatozoides: forma de la cabeza característica de cada
especie (oval y plana), cubierta en sus dos terceras partes por el acrosoma; y
la cola compuesta por las piezas media, principal y terminal (véase Figura 1);
en la pieza media se encuentran las mitocondrias en forma de hélice. En esta
fase se elimina gran parte del citoplasma por desplazamiento del mismo hacia la
pieza terminal de la cola originando la llamada gota citoplasmática. El proceso de maduración termina con la Espermiación, o liberación de los espermatozoides a la luz del túbulo seminífero. Mediante movimientos peristálticos los espermas son transportados de la rete testis a los ductos eferentes y de allí al epidídimo en cuya cola se almacenan.
En la pubertad y a
lo largo de la vida adulta del macho se producen continuamente en los túbulos
seminíferos las células germinales y la
posterior liberación de espermatozoides en el proceso de espermatogenesis, los
cuales son reemplazados por espermatozoides de nuevas generaciones. Cada nueva
generación va empujando la anterior hacia el lumen del túbulo seminífero, a
tiempos e intervalos regulares lo que constituye el llamado ciclo del epitelio
seminífero, cuya duración de cada ciclo
en el toro es de 14 días y en el caballo 12 días.
Se requieren
de 4
a 5 ciclos para que una
espermatogonia tipo A del primer ciclo complete la metamorfosis para un total
de 60 días, duración de la
espermatogénesis.
ESPERMATOZOIDE FERTIL
Para que el espermatozoide sea capaz de fecundar el óvulo debe sufrir una
serie de cambios tanto en los testículos como en las vías genitales femeninas.
CAMBIOS EN
EL EPIDIDIMO
El espermatozoide una
vez ha sido
expulsado del tubo
seminífero, no es
apto para fecundar.
Comienza a adquirir
ésta capacidad en
su paso por
el epidídimo, en
donde sufre una
serie de cambios morfológicos, fisiológicos
y bioquímicos cuyo
conjunto recibe el
nombre de Maduración
Epididimal y tiene una duración
de 10 a
15 días. Los cambios en el epidídimo
dependen de las secreciones del epidídimo y del tiempo de transporte.
Estos cambios
son:
· Adquisición
de la motilidad. (GADDUM)
·
Modificaciones en
la distribución y densidad de
grupos aniónicos en
su superficie. (YANAGIMACHI)
·
Formación de
puentes de sulfuro
-S-S- tanto en
el núcleo como
en estructuras de la
cola del espermio. (CHANG)
El conjunto
de cambios señalados, es quizás lo que le permite
al espermatozoide adquirir eventualmente, su capacidad fecundante.
CAMBIOS EN
LA VIA GENITAL
FEMENINA
El espermatozoide eyaculado, a diferencia del testicular,
es capaz de fecundar,
debido a los
cambios que ocurren
en condiciones normales
en la vía
genital femenina. Es necesaria
la Capacitación Espermática para
la fecundación del
oocito.
El
espermatozoide adquiere la capacidad de mover el flagelo en su tránsito por el
epidídimo, pero el movimiento empieza después de la eyaculación. Este proceso
es conocido como la Activación del Esperma. (OLIVERA)
La
movilidad del esperma se desencadena por cambios en el medio iónico
extracelular, por interacción con ligandos específicos y por glucosa, presentes
en el líquido seminal y en el tracto reproductivo femenino; estos cambios
inducen señales citosólicas flagelares, a través de la fosforilación de
proteínas, de canales de Ca++
y de vías dependientes de nucleótidos
cíclicos (GMPc y AMPc).
El
espermatozoide, activado y capturado por las microvellosidades del istmo
del oviducto se capacita, y esto
desencadena señales intracelulares que inducen la hiperactivación. La activación y la hiperactivación utilizan
mecanismos moleculares similares para generar el movimiento del flagelo cuyo
eje funcional es el axonema y cuya proteína motora principal es la
dineína. El axonema, además, está compuesto por microtúbulos, moléculas
chaperonas, proteínas fijadoras de calcio y proteínas quinasas/fosfatasas.
CAPACITACION ESPERMATICA
“ La capacitación
espermática comprende todos
los cambios concurrentes
que permitan que
frente a niveles
fisiológicos de Ca ++
libre se induzca
la “Reacción del Acrosoma” y
que el flagelo
de la cola sea “Hiperactivado “ (BEDFORD)
Los
espermatozoides son retenidos en las criptas oviductales y allí pierden los
factores decapacitantes como mucopolisacáridos y proteínas que habían aportado
las glándulas anexas; éste es el comienzo del proceso conocido como Capacitación
, nombre que indica el potencial que adquiere el espermatozoide para
hiperactivarse y para lograr la Reacción Acrosomal. Este proceso se
lleva a cabo en las criptas del istmo donde se adosan los espermas, y termina
con la liberación del mismo hacia el ámpula; aquí al encontrar
el oocito ocurre el reconocimiento y la adherencia para que el espermatozoide
empiece a atravesar la zona pelúcida. ZP
La
capacitación, se caracteriza por la salida de colesterol de la membrana y el
ingreso de Ca++ y HCO3- al citosol (OLIVERA) lo cual
tiende a aumentar la
fluidificación de la
membrana, niveles de AMPc y
cambios en algunas enzimas
como la proteinKinasa (LANGLAIS)
Todos
los espermatozoides no son
capacitados al mismo
tiempo, sino que lo
hacen en un período
relativamente largo de varias horas dependiendo de
su localización en
el tracto femenino
No hay duda que la membrana plasmática del espermatozoide, particularmente la
cabeza, sufre una serie
de cambios bioquímicos durante
la capacitación. Durante la
mezcla del esperma con el plasma seminal, este último recubre el
esperma con varias proteínas, las cuales
son retiradas en el tracto genital femenino.
Un concepto importante en relación con
la capacitación es el que
este proceso puede
ser reversible si se reincorporan
los espermatozoides capacitados al
plasma seminal. Por ejemplo, cuando
se retiran espermatozoides
capacitados del tracto reproductivo femenino y se mezclan con
plasma seminal, estos se decapacitan
nuevamente, necesitándose de un nuevo período de capacitación en el tracto genital
para que puedan ser
fértiles. (SENDER)
HIPERACTIVACION DE LA MOTILIDAD
La aparición
de la Hiperactivación de la Motilidad es
necesaria para la
penetración de las
cubiertas ovocitarias,
particularmente la
Zona Pelúcida. (BEDFORD)
Cuando
el espermatozoide alcanza el istmo del oviducto inicia un movimiento
asimétrico, amplio y acelerado del flagelo (característico de la hiperactivación), lo que lo lleva a
moverse en círculos y lo ayuda a liberarse de las criptas oviductales para avanzar
a través del lumen y alcanzar la ámpula, atravesar el cúmulus ooforo (células
de la granulosa que rodean el oocito) y adosarse a la ZP donde es
reconocido (reconocimiento entre gametos)
La hiperactivación de la motilidad sucede en
la ámpula del oviducto,
varía de una motilidad progresiva en
línea a una
motilidad acelerada en círculos y
se cree es originada por la
presencia de algunas moléculas específicas producidas en
el epitelio de esta zona y se desencadena por cambios en el medio
iónico extracelular, por interacción con ligandos específicos y por glucosa,
presentes en el líquido seminal y en el tracto reproductivo femenino; estos
cambios inducen señales citosólicas flagelares, a través de la fosforilación de
proteínas, de canales de Ca++ y
de vías dependientes de nucleótidos cíclicos (GMPc y AMPc) (SENDER-
OLIVERA)
Los
ligandos específicos más conocidos son: la progesterona y el esteroide
sulfatado SAAF (Sperm Activating and Attracting Factor) que inducen la entrada
de Ca++; el péptido activador de espermatozoide (PAS) y el
péptido atrial natriurético (PAN) que actúan, ya sea por medio de un receptor
de membrana, o por activación directa de la guanilil ciclasa ligada a membrana
(GCm).
Otros
ligandos específicos son los factores de tipo olfatorio y odorante (hOR17-4)
producidos por el oocito para inducir la quimiotaxis del espermatozoide.
La hiperactivación depende
de la temperatura
con un tiempo
mínimo de 2.5
Hs a 40° C
y de 12
Hs a 23° C.
Normalmente la hiperactivación tiende
a ocurrir al
mismo tiempo que
la reacción del
acrosoma. (MAHI)
La hiperactivación facilita el contacto del espermatozoide con el oocito, mediante la interacción de
las proteínas de la superficie
de la zona ZP con las proteínas del
acrosoma.
La
ZP contiene tres glicoproteínas
denominadas Zona Proteinas 1-2-3 (ZP1-ZP2-ZP3). La ZP1 y ZP2 suministran
las proteínas que conforman la estructura e integridad de
la ZP. La ZP3 actúa como un receptor
hormonal y se une a proteínas
de la membrana del espermatozoide.
La membrana plasmática del
espermatozoide posee dos sitios de unión a la ZP. El primero se denomina
como Sitio de Unión Primario de
la ZP, responsable de la
adherencia del esperma a la ZP. El segundo se denomina Sitio
de Unión Promoción de la Reacción del Acrosoma. Cuando se produce el
contacto de estos sitios con la
molécula ZP3 se produce una señal de transducción, con lo cual se
inicia la reacción del acrosoma
REACCION DEL ACROSOMA.
La reacción
del acrosoma comienza cuando la membrana plasmática del
espermatozoide se fusiona en
múltiples sitios con la membrana acrosomal externa, en donde se presenta un proceso de perforación o
fenestración y se forman pequeñas
vesículas, proceso llamado vesiculación, que permite la
dispersión del contenido
acrosomal, quedando la membrana nuclear del
esperma rodeada por la membrana acrosomal
interna. La lesión de la
membrana acrosomal y la membrana plasmática
es irreversible y se debe a
los cambios de
presión osmótica, enfriamiento brusco, calentamiento brusco o
cambios marcados de pH.
La liberación de las enzimas acrosomales permite que
el espermatozoide digiera las membranas de la ZP
y penetre el oocito.
Austin y Bishop encontraron espermatozoides cuyo acrosoma había reaccionado mientras se movían entre las células del cúmulo ooforo. La fenestración que se produce durante la reacción del acrosoma, permite la salida gradual de hialuronidasa, cuya localización intraacrosómica ha sido comprobada, facilitando la penetración del cúmulo por parte del espermio.
La reacción
del acrosoma compromete fundamentalmente
la porción principal y más anterior del acrosoma, quedando la porción posterior
o segmento ecuatorial sin vesicularse. (BARROS)
La prematura reacción del
acrosoma impide la fertilidad
del espermatozoide.
Experimentalmente
se ha demostrado que la reacción del acrosoma es Ca ++
dependiente. Al incubar espermios en un medio sin Ca ++
la reacción no
se presenta. Posteriormente al
agregar Ca ++ éstos
sufren la reacción del acrosoma
y son capaces de fusionarse con
los ovocitos.
PENETRACION DEL ESPERMATOZOIDE
La penetración de la ZP por el espermatozoide es un proceso rápido y probablemente tome solo unos pocos minutos. La Acrosina es una de las enzimas liberadas que permite la hidrólisis de las proteínas de la ZP así como los cambios para que el espermio se una a la ZP.
La fuerza mecánica generada por el movimiento flagelar de la cola es suficiente para empujar el espermio a través de un espacio oblicuo en la ZP denominado Zona Lisina.
· FUSION DE LAS MEMBRANAS
Cuando
el espermatozoide penetra
totalmente la ZP y alcanza el espacio privitelino (espacio entre la ZP
y la membrana plasmática del oocito) en
donde hay una capa de
microvellosidades de la membrana plasmática del
oocito. La membrana plasmática del oocito se
fusiona con el
segmento ecuatorial y el espermatozoide fértil es
engullido, facilitando la
mezcla de proteínas
en este sitio denominado Fusión de Proteinas. La única región libre
es aquella que se encuentra por
encima del sitio en donde se ubica la placa de la segunda metafase. En ésta
zona no se ha observado nunca fusión gamética. Probablemente ésta
diferenciación evita que el núcleo espermático sea eliminado junto con el 2°
polocito.
Luego de la fusión de las membranas el oocito
sufre una serie
de cambios que le permiten
prepararse para la
embriogénesis temprana.
Durante
la primera y segunda división meiótica de la oogénesis, pequeñas
estructuras esféricas, densas denominadas Gránulos Corticales que contienen mucopolisacáridos, proteasas,
activadores de plasminógeno, fosfatasas ácidas y peroxidasas, se
mueven hacia la periferia del
citoplasma y entran en Exocitosis o Decondensación lo cual permite
la salida de su contenido
originando el Bloqueo o Reacción de La ZP
que impide la penetración de más espermatozoides o Polispermia.
Después de la
penetración del espermatozoide tiene lugar
la Decondensación del Núcleo de
tal manera que los
cromosomas del macho
se aparean o fusionan con
los cromosomas del
pronúcleo femenino, formándose
por lo tanto
un solo núcleo con el ADN
del macho y la hembra, evento denominado Singamia que
da lugar a
la formación del Zigoto
como primer paso para
la embriogénesis.
BIBLIOGRAFIA
AUSTIN
C.R. BISHOP M.W.H. .- Role of the rodent acrosome and perforatorium infertilization. Proc. Roy. Soc. Lond.
Ser. B. 149:
241 1.958.
BARROS C. .-Fecundación. Curso Internacional relaciones Materno-Fetales y Nuevas Tecnologías en Transferencia
De Embriones. 169 – 202 1.984
BEDFORD J.M. .- Significance of
need for sperm
capacitation before fertilization
in Eutherian mammals. Biol.
Reprod. 28: 108 –120 1.983
CHANG M.C..- Fertilizing capacity of spermatozoa deposited into the fallopian tubes. Nature – Lond – 1.951.
GADDUM
P. .- Sperm maturation in
male reproductive tract: Development of
motility Anat. Rec. 161: 471 – 482 .
1.986
HAFEZ E.S.E. .- Transporte y
Supervivencia de los
Gametos. Reproducción e Inseminación
Artificial en Animales.
182 – 204. 1.989
LANGLAIS J. KAN FWK. GRANGER L. RAYMOND L BLEAU G. ROBERTS KD. Identification of sterol
acceptors that stimulate choresterol effux from human spermatozoa during in vitro capacitation. Gamet
Res. 20: 185 – 201 1.998
MAHI C.A. y YANAGIMACHI R. The efect of temperature, osmolarity and hydrogen ion concentration on the
activation and acrosome reaction of golden hamster spermatozoa. J. Reprod. Fertil. 35: 55 – 66 1.973
RUIZ . – OLIVERA A. Ovarían follicular dynamics in suckled o zebu cows (Bos Indicus) by real time ultrasonography.
Anim Reprod. Sci; 64:211-220.
SENGER P.L. PATH WAY TO PREGNANCY AND PARTURITION Segunda Edición. Washington State Uniersity
Research
& Technology Park 1610 NE Eastgate Blvd., Pullman, WA 99163-5607 Website:
YANAGIMACHI
R. .-Mechanisms of fertilization
in mammals. En : L.
Mastroianni Jr, Bidggers Eds.Fertilization
and Embryonic Development in Vitro. Plenum Publishing Co. pp 81 – 182
and Embryonic Development in Vitro. Plenum Publishing Co. pp 81 – 182
No hay comentarios:
Publicar un comentario